Versuch: Alkoholtest mit der Alkohol-Dehydrogenase (ADH)
Schülerversuch, mit Vorbereitungen 2 Stunden.
Beim Experimentieren den Allgemeinen Warnhinweis unbedingt beachten.
Geräte
Messpipetten, Feinpipetten ("Eppendorf-Pipetten"), Quarz-Küvetten, Messkolben,
UV-Messvorrichtung (320-370 nm).
Chemikalien
Ethanol (F,T), dest. Wasser, ADH (z. B. aus Hefe), NAD+, Semicarbazid-hydrochlorid
(Xn), Natronlauge (c = 0,1 mol/l) (Xi), Salzsäure (c = 0,1 mol/l) (Xi).
Lösungen
Die Mengenangaben sind für Küvetten der Schichtdicke 1 cm berechnet.
Achtung:
1 ADH-Stammlösung: 15 mg werden in 5 ml dest. Wasser gelöst.
2 Ethanol-Verdünnungen: 1-, 2-, 5 Vol%.
3 Reaktionspuffer: Die Konzentration der Natronlauge ist stets c = 0,1 mol/l.
Lösung 1: 751 mg Glycin in 100 ml Natronlauge
Lösung 2: 1,12 g Semicarbazid-hydrochlorid in 100 ml Natronlauge
Gib zusammen:
30 ml Natronlauge, 70 ml Lösung 1 und 10 ml Lösung 2.
Lösungen gut vermischen und mit Salzsäure (c = 0,1 mol/l) auf pH 8,6 einstellen.
4 NAD+-Lösung: 50 mg NAD+ in 5 ml Reaktionspuffer lösen.
DurchführungErgebnis
Du erhältst Extinktionswerte, die proportional zur Konzentration sind.