Versuch: Alkoholtest mit der Alkohol-Dehydrogenase (ADH)

Schülerversuch, mit Vorbereitungen 2 Stunden.

Beim Experimentieren den Allgemeinen Warnhinweis unbedingt beachten.

Geräte
Messpipetten, Feinpipetten ("Eppendorf-Pipetten"), Quarz-Küvetten, Messkolben, UV-Messvorrichtung (320-370 nm).

Chemikalien
Ethanol (F,T), dest. Wasser, ADH (z. B. aus Hefe), NAD+, Semicarbazid-hydrochlorid (Xn), Natronlauge (c = 0,1 mol/l) (Xi), Salzsäure (c = 0,1 mol/l) (Xi).

Lösungen
Die Mengenangaben sind für Küvetten der Schichtdicke 1 cm berechnet.

Achtung:
Alle Gefäße müssen sehr sauber sein, denn Enzyme sind sehr empfindlich!

1 ADH-Stammlösung: 15 mg werden in 5 ml dest. Wasser gelöst.

2 Ethanol-Verdünnungen: 1-, 2-, 5 Vol%.

3 Reaktionspuffer: Die Konzentration der Natronlauge ist stets c = 0,1 mol/l.
   Lösung 1: 751 mg Glycin in 100 ml Natronlauge
   Lösung 2: 1,12 g Semicarbazid-hydrochlorid in 100 ml Natronlauge
   Gib zusammen:
   30 ml Natronlauge, 70 ml Lösung 1 und 10 ml Lösung 2.
   Lösungen gut vermischen und mit Salzsäure (c = 0,1 mol/l) auf pH 8,6 einstellen.

4 NAD+-Lösung: 50 mg NAD+ in 5 ml Reaktionspuffer lösen.

Durchführung
Mische 2,8 ml Reaktionspuffer und 0,1 ml NAD+-Lösung. Dann gib 0,05 ml Ethanollösung zu. Gut vermischen.
Nun werden 0,05 ml ADH-Lösung zugegeben, die Stoppuhr gestartet. Das Ablesen der Extinktion erfolgt in Minutenabständen oder nach 10 min.
Mit anderen Alkoholkonzentrationen wiederholen.

Ergebnis
Du erhältst Extinktionswerte, die proportional zur Konzentration sind.

Hintergründe zum Experiment

Diese Seite ist Teil eines großen Webseitenangebots mit weiteren Texten und Experimentiervorschriften auf Prof. Blumes Bildungsserver für Chemie.
Letzte Überarbeitung: 19. Januar 2006, Dagmar Wiechoczek